【项目动态】成人呼吸道感染病原诊断核酸检测技术临床应用专家共识（2023）

日前，由中华检验医学培训工程专家委员会组织我国多学科专家共同撰写的《成人呼吸道感染病原诊断核酸检测技术临床应用专家共识（2023）》发表于《协和医学杂志》。

共识参考国内外指南及文献，分析了实时荧光聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）技术、等温扩增技术、数字PCR技术、核酸即时检测技术和病原体高通量测序技术的临床应用场景、技术特点和性能验证要求，以及该类技术在成人急性上呼吸道感染、气管支气管炎、社区获得性肺炎、医院获得性肺炎/呼吸机相关肺炎、慢性阻塞性肺疾病急性加重、肺结核和免疫功能受损人群呼吸道感染中的应用，供临床借鉴参考。

01专家共识核心意见

共识主要分为两大部分，包括呼吸道病原体核酸检测方法与呼吸道感染病原体临床诊断。该共识纳入国内外55篇相关文献并经过多轮撰写修订和讨论，最终形成了基于核酸检测技术和临床应用场景的15条核心专家意见。

在核心专家意见中，明确了PCR核酸检测方法不同技术方案在不同应用场景的推荐应用，并指出对于急性上呼吸道感染高危人群，尤其是在流感病毒、新型冠状病毒等流行季节及高风险区域，采用实时荧光PCR、核酸即时检测等技术可以实现发热门诊、门急诊人群的呼吸道病原体的筛查，有利于病原体的早期诊断，对于存在住院风险的高危人群及社区获得性肺炎患者，可采用多靶标病原体核酸检测技术明确病原，可缩短抗生素使用时间和患者住院时间。

02呼吸道病原体核酸检测方法

该部分涉及了以 PCR为基础发展出的实时荧光PCR、多重PCR、数字PCR和等温扩增技术，以及核酸即时检测技术、高通量测序技术等多种技术方法，对其临床应用场景、技术特点、性能验证要求等进行了详细介绍，并对其优劣势进行了说明。

实时荧光PCR技术是一种可对核酸进行定量的试验方法，其原理主要是通过实时采集荧光信号对核酸扩增进行监测。在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值与其起始拷贝数存在线性关系，可实现对未知样本的定量检测。主要适用于门急诊、住院患者和大人群筛查。主要用于鼻咽拭子、痰和支气管肺泡灌洗液等样本，已有单靶标和多靶标检测试剂可用，特点是灵敏度和特异度好，但特异性引物探针的成本和对仪器的要求较高。

等温扩增技术相较传统 PCR 变温技术，通常不需要改变反应温度，该技术方案多、技术原理差异较大，且各具优势，但基本原理仍是以特异性酶和引物进行扩增。等温扩增技术大多为指数扩增，目前多为定性检测。主要适用于发热门诊、急诊患者上呼吸道感染病毒(如新型冠状病毒、流感病毒等)及下呼吸道感染细菌(如肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等)的快速筛查。

核酸即时检测为 POCT 技术中涉及核酸检测的一大类技术的总称， 是核酸提取技术和分子扩增技术（包括实时荧光 PCR 、巢式 PCR、等温扩增、数字PCR等技术）的融和。其最大特点是将核酸的提取、扩增、检测均置于一个反应装置中，通过特定设备对扩增信号检测，完成对靶标核酸的筛查。目前核酸POCT主要以全自动封闭管理系统为主。主要适用于发热门诊、急诊、ICU和某些特定病区感染患者的病原体快速检测。

病原体高通量测序技术是采用高通量测序技术对临床标本中的核酸进行测序，通过与微生物参考基因组比对获取标本中的微生物物种组成、物种丰度等信息。目前该技术主要分为三类：无偏倚检测的 mNGS、检测多重病原体及其耐药基因或毒力基因的tNGS 和获取某一种或多种病原体全基因组数据的高通量测序技术（whole-genome sequencing ，WGS）。由于病原体高通量测序技术复杂、结果解读难度大且价格昂贵， 建议根据临床需求在传统微生物检测的基础上选择性使用，例如，需尽快明确病原学诊断时、目前可及的微生物检验手段无法明确诊断时、出现聚集性呼吸道传染性病例需进行病原体溯源时。

03呼吸道感染病原体临床诊断

根据临床特定场景涉及了急性上呼吸道感染、气管支气管炎、肺炎、慢性阻塞性肺疾病急性加重、肺结核及结核胸膜炎、免疫功能受损人群的呼吸道感染等多种常见临床呼吸道感染，对这些病症的临床表现、病原特点、检测指征、标本与技术方法、检测方案策略等进行了详细阐述，强调了各种临床病症应根据具体情况采用最适宜的检测方法从而达到最佳诊断目标。

成人呼吸道感染类型多样， 不同感染类型及不同基础疾病患者病原谱各具特点，在临床常规诊疗过程中，应以患者临床症状体征为基础，联合应用影学、传统微生物学、免疫学和分子生物学等检测技术，依据相应检测标准作出快速、精准诊断。分子生物学诊断技术在临床的应用目前仍有较多问题亟待解决，尤其是对临床结果的正确解读。不同检测技术所提供的结果具有不同临床意义，联合应用可进一步提高病原学检测的灵敏度和特异度， 更好的解释患者的病程发展并进行治疗监测。

博奥晶典开发出了针对呼吸道疾病感染解决方案，包含六项呼吸道病毒检测、呼吸道病原菌核酸检测系统、CCID™广谱病原微生物芯片快速检测、MAPMI®技术等，为您的健康呼吸保驾护航。

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六项呼吸道病毒核酸检测试剂盒

博奥晶典六项呼吸道病毒核酸检测试剂盒采用一步法RT-PCR-熔解曲线技术，选取待检病原体核酸特异性保守序列设计特异性引物和探针，基于特定的荧光通道和熔解曲线Tm值，能够快速检测包括呼吸道合胞病毒在内的六类临床常见的呼吸道病原体，实现对患者的精准诊断、精准治疗。

呼吸道病原菌核酸检测系统

作为微流控芯片与恒温核酸扩增技术完美结合的产品，博奥晶典呼吸道病原菌核酸检测系统能够对病原微生物分子进行快速、高通量并行检测，一次可检测肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌等8种常见的呼吸道感染相关病原微生物，检测报告时间缩短到2小时。

目前，呼吸道病原菌核酸检测试剂及配套仪器平台均获得了NMPA医疗器械注册证书，受到临床普遍欢迎。其中，高通量恒温扩增核酸分析仪可以同时实现多人份样本的独立并行检测，极大地满足了当前大中型医院在感染性疾病诊断领域实现规模化检测的临床需求。

呼吸道病原菌核酸检测试剂盒（恒温扩增芯片法）

（国械注准：20173401346）

恒温扩增微流控芯片核酸分析仪

（国械注准：20173401354）

恒温扩增核酸分析仪

（国械注准：20193220539）

CCID™广谱病原微生物芯片快速检测

博奥晶典CCID™广谱病原微生物芯片快速检测可在4-8小时鉴定173种病原微生物，其中包含临床常见的74种细菌及寄生虫、22种真菌、40种病毒及37种细菌耐药基因，并且在检测完成后对阳性指标进行定量复检，给出参考浓度、辅助临床医生判定病情。

MAPMI®技术

MAPMI®（Metagenomic Analysis Pipeline for Microbial Identification）技术是博奥晶典基于自主的BES4000高通量测序平台研发的超广谱病原体筛查技术，覆盖3.2万种的病原微生物及5339种耐药基因，可直接对样本中的核酸进行检测，快速、精准的获得样本中微生物序列信息，可对病原体的变异情况进行进一步追踪监控，在新发、突发重大疫情的监控及快速反应体系构建上具有重大现实意义。同时，基于检测结果及患者临床特征，对可疑致病微生物按照不同感染部位提供个体化用药提示，实现感染性疾病的诊断、用药全流程诊疗。

BES4000基因测序仪

（国械注准：20203220502）

MAPMI® 2.0 “mNGS+抗感染用药参考”在病原体的快速、准确和全面鉴定的同时，基于超广谱病原微生物（mNGS）检测结果及患者临床特征，对可疑致病微生物按照不同感染部位提供个体化用药提示，直击感染性疾病诊疗痛点，提高诊疗效率，降低耐药风险；全面用药信息提示，综合临床信息，快速用药决策，减少耐药及不良反应的发生；整合了国内外权威的临床用药专著，以及抗感染相关指南和专家共识，为疾病的诊断，治疗提供有力的证据，减少误诊，误治，决策更安全。